- 郝晓甜;陈盼;毛群颖;邵杰;林惠娟;罗震;吴星;梁争论;
目的建立一种简单、快速、高通量的检测柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)中和抗体假病毒荧光定量检测方法 (pseudovirus luciferase assay,PVLA)。方法首先构建CV-A16核衣壳蛋白表达子及插入萤火虫荧光素酶报告基因的肠道病毒71型(EV-A71)复制子,再顺次转染293T细胞,互补包装得到CVA16假病毒。通过条件优化并使用CV-A16国家中和抗体标准品,建立CV-A16中和抗体定量检测方法(PVLA)。用该方法检测15份CV-A16病毒免疫小鼠血清,并与传统CPE法的检测结果进行统计学分析,比较两种方法检测结果的一致性。结果得到CV-A16假病毒,建立了CV-A16假病毒中和抗体检测方法,该方法检测CV-A16中和抗体滴度的结果与传统CPE法的检测结果高度一致(相关系数r2为0.91)。结论CV-A16假病毒中和抗体检测方法可作为CPE法的替代方法,用于CV-A16中和抗体的快速检测。
2016年01期 v.6 6-11页 [查看摘要][在线阅读][下载 241K] - 田子颖;寸建萍;李琼芬;丁峥嵘;赵智娴;张杰;田炳均;
目的对中国云南省6株和其他10个省(含中国台湾省)不同时间、不同来源分离的柯萨奇病毒A组4型(coxsackievirus A4,CV-A4)VP1区基因特征进行分析。方法对云南省2014年手足口病实验室监测系统、2012年健康人群和2004年急性迟缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)监测系统中分离到的6株CV-A4病毒VP1区基因进行基因扩增和测序;按参考文献下载基因库中CV-A4病毒VP1区基因参考序列和其他省CV-A4基因序列,用MEGA 5.0软件计算不同毒株的核苷酸和氨基酸差异率,并构建系统进化树,进行基因特征和分子流行病学分析。结果云南6株CV-A4均为基因1型的B亚型(genotype1,subtype B)。与国内其他省毒株比较,除1998年2株山东省和2006年1株吉林省AFP分离株为基因1型的A亚型(genotype 1,subtype A),台湾省4株(AB571583、AB571584、AB571586、AB571587)为基因2型的B亚型(genotype 2,subtype B)外,其他中国分离株均为基因1型的B亚型。结论除CVA4病毒的原型株High Point(AY421762)外,国内外CV-A4病毒存在两个基因型,两个基因型又分为两个亚型,即A和B亚型;中国分离株大都为基因1型,其中又以B亚型为主。不同于EV-A71和CV-A16,CV-A4的基因型分布不是很广。
2016年01期 v.6 12-16页 [查看摘要][在线阅读][下载 270K] - 王江华;费然;王雪艳;张海莹;魏来;
目的检测丙型肝炎病毒(HCV)复制子细胞培养上清中外泌体HCV RNA的稳定性和表达水平,并研究干扰素α抑制HCV复制过程中,外泌体HCV RNA水平与胞内病毒复制水平的相关性。方法建立G418筛选稳定表达的HCV复制子细胞模型HCV-Con I-Rep,比较超速离心和沉淀法对HCV RNA阳性外泌体的分离效果;实时定量PCR法检测培养上清的HCV RNA水平并评价其对表面活性剂NP-40和RNase A的敏感性;不同剂量干扰素α(0、0.4、2、10、50、250IU/ml)处理72h或100IU/ml干扰素α处理不同时间(0、6、12、24、48、72h),分别检测上清和胞内HCV RNA水平,并评价两者的相关性。结果成功构建了稳定表达的HCV复制子细胞模型;PEG沉淀较超速离心法能够更高效地分离外泌体;HCV复制子细胞培养上清外泌体中含有较高水平(~106 IU/ml)的HCV RNA,但在表面活性剂的存在下,可因外泌体脂质膜破坏而被RNase A降解;干扰素α处理过程中,胞内HCV RNA和上清中外泌体HCV RNA水平均显著降低;Spearman相关性分析提示,胞内HCV RNA和上清中外泌体HCV RNA在不同剂量干扰素处理组和不同处理时间组的水平均具有显著相关性(r=0.9690,P<0.01和r=0.7069,P=0.001)。结论 HCV亚基因组复制子细胞培养上清外泌体HCV RNA水平可作为更方便检测的指标,反映胞内病毒复制水平的变化。
2016年01期 v.6 17-21页 [查看摘要][在线阅读][下载 206K] - 高得勇;娄小丽;王迎迎;汪妍妍;徐国荣;吴剑琴;夏利萍;刘亮明;
目的研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)1b型F蛋白抗原在慢性HCV感染者中产生的特异性抗原和抗体的表达并检测其流行率。方法应用人工合成HCV 1b型的双框移动F蛋白多肽,采用ELISA方法,对其在慢性HCV感染者中F蛋白的流行率进行分析;合成并纯化抗HCV 1b型F蛋白的抗体,采用Western blot方法验证抗体的特异性,包被纯化的F蛋白的特异性抗体,检测慢性HCV患者血清中F蛋白抗原的表达及其流行率。结果 HCV 1b型F蛋白的抗体在32例HCV 1b型慢性感染者中有19例可以检测到抗体的表达,其流行率为59.38%,而非HCV 1b型慢性感染者、健康对照及慢性HBV感染者中未检测到HCV 1b型F蛋白的抗体,其流行率为0;Western blot方法鉴定了人工合成的HCV 1b型F蛋白抗体的特异性及纯度;ELISA方法检测32例HCV 1b型感染者中有6例检测到HCV 1b型F蛋白抗原的表达(18.75%),而非HCV 1b型慢性感染者、健康对照及慢性HBV感染者中未检测到HCV 1b型F蛋白抗原的表达。结论丙型肝炎病毒F蛋白抗体的产生具有型免疫特异性的特点,不同基因型F蛋白产生的抗体不同,且慢性HCV感染者中有F蛋白抗原的特异性表达。
2016年01期 v.6 22-26页 [查看摘要][在线阅读][下载 220K] - 冼永超;李秀芬;易丹;程书权;倪辉;黄成军;
目的探讨桂林地区不同基因分型慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者临床表现及肝内免疫活性细胞(CD4+、CD8+、CD20+、CD57+)与肝脏病理的关系。方法对70例2008年1月至2013年12月在桂林市第三人民医院肝病科住院CHB患者进行肝组织活检术,其中B基因型44例,C基因型26例,并运用免疫组织化学法分析肝组织内CD4+、CD8+、CD20+、CD57+淋巴细胞的表达,比较不同乙型肝炎病毒(HBV)基因分型患者CD4+、CD8+、CD20+、CD57+淋巴细胞与临床相关性。结果桂林地区CHB患者以B基因型为主,B、C两组基因型在年龄、白蛋白(albumin,ALB)、球蛋白(globulin,GLB)差异无统计学意义,而C基因型丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)水平高于B基因型(P<0.05),B基因型HBeAg阳性率高于C基因型(P<0.05),C基因型肝脏组织病理损害程度比B基因型严重(P<0.05);B基因型CHB患者炎症程度到达G4组及C基因型到达G3组肝组织中CD4+、CD8+、CD20+的表达均比G1组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);C基因型组炎症程度到达G4肝组织中CD57+T细胞表达比G1明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),B基因型ALT与CD4+、CD8+、CD20+T细胞水平呈直线相关(r值分别为0.554、0.678、0.740,P均<0.01),与CD57+无相关性,而C基因型ALT与CD8+、CD20+、CD57+T淋巴细胞水平呈直线相关关系(r值分别为0.517、0.626、0.737,P均<0.05),与CD4+无相关性。结论CHB患者以B基因型为主,B基因型患者HBeAg阳性率明显高于C基因型患者,C基因型肝脏组织病理损害程度比B基因型严重,B、C基因型患者肝组织内CD4+、CD8+、CD20+表达与肝组织内炎症分级均有明显相关性,不同基因型疾病严重程度与机体的免疫状况有关。
2016年01期 v.6 27-33页 [查看摘要][在线阅读][下载 169K] -