- 冯云;张海林;付士红;李铭华;王环宇;梁国栋;
目的对云南省新分离的2株流行性乙型脑炎(乙脑)病毒进行全基因组序列测定和分析,了解当地乙脑病毒基因组结构及分型特征。方法设计乙脑病毒全基因组扩增引物,RT-PCR扩增片段,PCR产物直接测序,拼接后获得全基因组序列。通过Clustal X(1.8)、DNASTAR、GENEDOC(3.2)等生物学软件进行核苷酸序列及氨基酸序列分析和病毒的系统进化分析。结果从2007年云南省捕获的三带喙库蚊中分离到2株乙脑病毒(TC07018、TC07172),并对病毒株的全基因组序列进行了分子生物学研究,结果提示TC07018、TC07172株与JEVMie40株的核苷酸同源性最高,为98.4%和98.7%,与JKT6468株核苷酸同源性最低,为83.6%和83.5%。2个分离株与JEVMie40、SH17M-07和HEN0701株氨基酸同源性最高,均为99.6%,与JKT6468株氨基酸同源性最低,为95.5%和95.4%。2个新分离株与我国现在最常用的疫苗株SA14-14-2相比较,核苷酸同源性为88.7%和88.6%,氨基酸同源性为97.1%。基于全基因序列,从基因库中选择了36株乙脑病毒与分离株进行进化分析,2个新分离株与KV1899和HEN0701的进化关系最接近,都属于基因Ⅰ型。结论新分离的2株乙脑病毒属于基因Ⅰ型,此为滇西地区首次分离该型病毒。这2株病毒与国内外基因Ⅰ型乙脑病毒流行株间存在一定差异,但根据抗原和毒力位点分析表明,乙脑SA14-14-2疫苗株能保护该型病毒。
2012年01期 v.2 23-29页 [查看摘要][在线阅读][下载 397K] - 雷迎峰;杨敬;尹文;吕欣;安群星;黄小军;姚敏;徐志凯;
目的建立双稳定表达HCV NS3/4A蛋白酶的HepG2细胞系。方法将pTET-ON质粒转染HepG2细胞后用G418压力选择,利用Tet反应性质粒pTER2luc筛选高表达、低背景的TET-ON稳定转染的细胞。HindⅢ单切pMD18T-NS3/4A,平端化后再用BamHⅠ单切,然后与用BamHⅠ与EcoRⅤ双切的pTER2hyg质粒连接,转化菌株JM109感受态细胞,获得重组质粒pTER2hyg-NS3/4A,经PCR鉴定及序列测定。将pTER2hyg-NS3/4A用脂质体法转染TET-ON稳定转染HepG2细胞,经持续潮霉素压力选择和克隆化获稳定转染的细胞系,用实时荧光RT-PCR筛选出高水平表达NS3/4A的细胞株,并用Western blot验证。结果成功建立了双稳定的可诱导表达NS3/4A蛋白酶的HepG2细胞株。结论本研究构建的细胞株为建立以细胞为基础的抗HCV药物筛选系统提供了有效的筛选细胞系。
2012年01期 v.2 30-33页 [查看摘要][在线阅读][下载 269K] - 汤晶晶;田炳均;罗梅;赵智娴;张杰;庞颜坤;张丽芬;丁峥嵘;
目的对云南省4例边境口岸健康儿童的阳性病毒株进行分子生物学鉴定及基因特征分析。方法用扩增人类肠道病毒VP1部分编码区通用引物292/222进行逆转录—聚合酶链反应,反应产物纯化后进行序列测定。所得序列通过BLAST程序进行基因定型,并与国内外其他病毒株进行同源性分析,进而构建系统发生树进行基因分型,分析其进化来源及流行特征。结果本次研究的4株病毒为新型肠道病毒EV96型;4株间核苷酸同源性为82.7%～95.7%,且与云南省既往EV96核苷酸同源性较高;GenBank中获得的28株EV96型VP1区序列通过系统发生学分析可分为3个基因型,genotype 1和genotype 2、geno-type 3之间的遗传距离分别是0.193、0.205,genotype 2和genotype 3之间的遗传距离是0.220,表明各个基因型代表株之间的亲缘关系均较远。结论包括本次研究的4株毒株在内的所有云南株相对聚集在geno-type 1中,但出现不同的分支,说明EV96在云南省的流行存在不同的传播链。利用分子生物学方法持续对云南省新型肠道病毒进行监测,可提供有价值的病毒遗传学信息。
2012年01期 v.2 34-37页 [查看摘要][在线阅读][下载 272K] - 李魁彪;狄飚;蔡衍珊;刘建华;徐建敏;吴新伟;和鹏;王鸣;
目的掌握广州市乙型肝炎(乙肝)病毒流行状况、基因型和分子进化情况。方法对广州市人群进行系统抽样,采集血样,用ELISA法分析乙肝病毒感染状况;从300份乙肝病毒表面抗原阳性血清(HBsAg)提取DNA,对S基因测序分析。结果广州市1～59岁人群乙肝表面抗原流行率为12.45%(95%CI10.54%～14.37%),低年龄组流行率显著低于高年龄组;广州市流行的乙肝病毒基因型有2种,其中B基因型占72.41%,C基因型占27.59%,不同毒株间核苷酸同源性为93.15%～99.91%。结论广州地区人群乙肝疫苗接种效果明显,但乙肝表面抗原流行率仍高于全国水平;S基因序列和各参考株高度同源,未发现其他基因型及有生物学意义的变异。
2012年01期 v.2 38-41页 [查看摘要][在线阅读][下载 249K] - 于德山;李红育;姜中毅;李保娣;段莉平;赵海;张慧;孟蕾;
目的掌握兰州地区严重急性呼吸道感染(SARI)住院病例病原谱的流行及构成。方法自2009年12月至2011年3月在兰州大学第一医院共采集符合SARI病例定义的咽拭子248人份,用实时荧光PCR方法检测流感病毒。对其中184例病例用多重PCR方法检测12种病毒及6种细菌,阳性标本进行流感病毒的分离与鉴定。结果 248例接受荧光PCR检测的病例中,46例(18.55%)流感病毒核酸阴性,其中,甲型H1N1流感病毒23例,H3N2亚型14例,甲型未分型5例,乙型4例,分离出流感病毒9株。184例病例多重PCR检测结果显示,总病原核酸检出率为69.02%(127/184),病毒类病原核酸检出率为42.93%(79/184)。流感病毒核酸阳性病例36例,阳性率19.56%(36/184)。呼吸道合胞病毒A/B阳性22例,阳性率11.96%,副流感病毒1～4型11例(5.98%),鼻病毒8例(4.35%),腺病毒7例(3.80%),偏肺病毒4例(2.17%),冠状病毒3例(1.63%);细菌核酸检出率为53.26%(98/184),其中肺炎链球菌52.17%(96/184),流感嗜血杆菌5.98%(11/184),肺炎支原体为4.89%(9/184);检出2种及以上病原合并感染的病例29.35%(54/184);未检出肺炎衣原体。肺炎链球菌阳性的96例病例中有54例(56.25%)同时检出其他病原。结论兰州市SARI病例的病毒类病原主要为流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、鼻病毒、腺病毒、偏肺病毒、冠状病毒等,细菌类病原主要为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体。
2012年01期 v.2 42-46页 [查看摘要][在线阅读][下载 144K] - 石磊泰;刘景华;曹守春;李加;吴小红;董关木;俞永新;
目的全面了解狂犬病病毒减毒株CTN-181的表型特征,并与其亲本株CTN-1进行比较。方法将CTN-181株病毒在BHK21细胞中培养,观察其细胞病变和空斑形成特性;用细胞培养的病毒以脑内、肌内和口腔的方式接种不同周龄的小白鼠,同时脑内接种家兔和豚鼠,以同法接种其亲本株CTN-1进行毒力比较。另外,将病毒在BHK21细胞连续传10代,在乳鼠脑内传3代观察其弱毒特性的稳定性。结果 CTN-181株在BHK21细胞上培养出现较CTN-1株明显的细胞病变、较高的空斑滴度。CTN-181株对家兔、豚鼠脑内接种不致病,对4周龄以上的小鼠任何途径接种均不致病,而其亲本株CTN-1株对这些动物均致病或致死。CTN-181株通过细胞传10代和乳鼠脑内传3代后减弱的毒力未回升,无弱毒返祖现象。结论 CTN-181是一株减弱且稳定的减毒株,其弱毒的表型特征与WHO推荐用于制备动物和犬的口服疫苗株SAG2相似。
2012年01期 v.2 47-52页 [查看摘要][在线阅读][下载 429K] - 孝晨;刘龙山;傅茜;王长希;
目的调查肾移植术后人类细小病毒B19(HPV B19)感染状况及其与移植后贫血的关系。方法随机抽取肾移植术后18个月内患者144例,定期检查HPV B19DNA拷贝数、抗体水平,并与同期普通体检者89例比较。以DNA结果将肾移植者分为感染组和非感染组,比较两组贫血状况。结果本研究144例患者中有27例确诊感染HPV B19,117名未感染,感染率为18.75%,显著高于同期普通人群(2.25%),差异有统计学意义(P<0.05)。感染组和非感染组盆血发生率、血红蛋白水平[(111.26±30.03)g/L vs(121.94±26.39)g/L]比较,差异有统计学意义。2例HPV B19DNA阳性者经骨髓穿刺证实为单纯红细胞再生障碍性贫血(PRCA),经免疫调节治愈。结论肾移植后早期患者HPV B19感染率较普通人群明显增高;肾移植后HPV B19感染与贫血相关,并可造成PRCA;肾移植后HPV B19感染相关的PRCA采用免疫调节治疗效果良好。
2012年01期 v.2 53-57页 [查看摘要][在线阅读][下载 137K] - 黄珊;何清;唐奇远;唐蔚;敖飞健;李知玉;张斌;白冰;
目的探讨《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》[《指南(2010年版)》]非活动性HBsAg携带者的肝组织病理特点。方法以《指南(2010年版)》描述的非活动性HBsAg携带者的血清学特征作为纳入标准,回顾性研究2000年1月～2010年11月广东医学院附属深圳市第三人民医院91例患者的临床病理资料,统计和分析非活动性HBsAg携带者肝组织炎症、纤维化程度及免疫组化HBcAg特点。结果 91例患者中,男性79例(86.8%),女性12例(13.2%)。年龄(36.0±8.7)岁(21～63岁),≤30岁29例(31.9%),30～40岁36例(39.5%),≥40岁26例(28.6%)。肝组织炎症G0者18例(19.8%),G1 70例(76.9%),G2 3例(3.3%),G3～4的0例。肝组织纤维化程度S0者5例(5.5%),S1 30例(33.0%),S2 25例(27.5%),S3 19例(20.9%),S4 12例(13.1%)。肝组织免疫组化HBcAg阳性者7例(7.7%),其中混合型1例(1.1%),浆型6例(6.6%);HBcAg阴性者84例(92.3%)。不同性别、年龄组间肝组织炎症、纤维化程度及HBcAg表达差异无统计学意义。结论《指南(2010年版)》血清学诊断为非活动性HBsAg携带者的患者,大部分肝组织炎症较轻微(96.7%的患者<G2),而肝纤维化较明显(61.5%的患者≥S2),个别患者仍存在活跃的组织炎症(3.3%的患者≥G2)及HBcAg阳性表达(7.7%)。本研究提示,肝脏活检对于了解非活动性HBsAg携带者是必需和重要的手段。
2012年01期 v.2 58-61页 [查看摘要][在线阅读][下载 119K]