- 陈晓琦;王继麟;郭长福;明平刚;张柳;涂晶;杨邦玲;段凯;黄佐林;
目的建立适合于肠道病毒71型(Vero细胞)灭活疫苗原液TritonX-100残留检测方法并加以验证。方法使用分光光度法对TritonX-100残留进行检测,并按照《中华人民共和国药典》(2010年版)二部中的相关规定对检测方法进行验证及初步应用。结果本方法在5~50μg/ml浓度范围能定量检测TritonX-100残留量,取不同浓度TritonX-100检测其回收率在85.97%~107.31%,RSD≤4.05%;重复性检测的RSD≤0.25%,中间精密度试验RSD≤3.18%;对检测中影响结果的参数:检测持续时间、检测温度、检测波长和检测试剂苯酚浓度在一定范围内适度变化后,检测理论浓度的TritonX-100,其平均回收率在86.42%~107.80%,RSD≤3.54%;340nm波长扫描PBS、5%苯酚、PBS+苯酚的A值均<0.01,TritonX-100及5%苯酚反应物的A值明显高于此值。结论本方法的准确度、精密度、专属性以及耐用性均符合规定,方法准确稳定,可用于对肠道病毒71型(Vero细胞)灭活疫苗原液中TritonX-100残留量的检测。
2015年02期 v.5 90-95页 [查看摘要][在线阅读][下载 146K] - 刘希佳;何小华;刘万红;
目的对分离自2010年中国湖北手足口患者的柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CVA16)病毒WH16株进行全基因组克隆、序列测定及进化分析。方法利用RT-PCR扩增覆盖基因组全长的cDNA片段,利用Over-lap PCR进行分步连接,得到CV-A16 WH16的全基因组cDNA克隆。对cDNA克隆进行测序,并利用BioEdit 4.8.8、EditSeq 5.01和MEGA 6.06软件进行序列分析和进化树构建。结果CV-A16 WH16基因组(未包含多聚腺苷酸尾)长度为7 406nt;WH16与CV-A16TS10/07、CV-A16原型株G-10以及EV71原型株BrCr的核苷酸一致性分别为97.7%、79.1%和79.5%,而氨基酸一致性分别为98.9%、94.7%和88.7%。全基因组进化树分析表明,CV-A16 WH16与CV-A16TS10/07亲缘关系最近,与G-10株存在显著差异;开放阅读框核苷酸序列进化树分析表明,CV-A16 WH16与EV71BrCr的亲缘关系较近。结论进化树分析表明,与G-10相比,CV-A16 WH16部分区域的核苷酸序列和BrCr的亲缘关系更近。
2015年02期 v.5 96-103页 [查看摘要][在线阅读][下载 468K] - 尉秀霞;张勇;祝双利;李晓嫘;胡岚;秦萌;杨军勇;董晓根;李洁;
目的了解北京市丰台区污水中埃可病毒6型(echovirus 6,ECHO6)的基因特征。方法选择吴家村污水处理厂为监测点,2012年1~12月,每月采集监测点污水进行肠道病毒(enterovirus,EV)分离和鉴定,并对分离到的ECHO6进行VP1编码区核苷酸序列测定和分析。结果在吴家村污水处理厂监测点,共分离到64株病毒,其中ECHO6病毒12株,在非脊髓灰质炎(脊灰)肠道病毒(non-poliomyelitis entero-viruses,NPEV)分离株中比例最高。选择10株ECHO6进行VP1编码区核苷酸序列分析,结果表明10株病毒的VP1区核苷酸同源性为92.9%~100.0%,与D5基因型代表株的VP1区核苷酸同源性最高,为88.7%~94.2%。进化树分析结果显示,北京市丰台区ECHO6分离株与D5基因型代表株处于同一分支,并在D5进化分支的不同簇中。结论北京市丰台区污水中ECHO6分离株为D5基因型并在D5进化分支的不同簇中,并为丰台区人群肠道病毒的监测提供重要的补充信息。
2015年02期 v.5 104-108页 [查看摘要][在线阅读][下载 232K] - 周兰兰;魏泉德;张丽荣;林毅雄;李红霞;郑予柯;沈韧;
目的分析2013年珠海市手足口病患儿柯萨奇病毒A2(CV-A2)5′UTR-VP4-VP2区基因特征,探讨其与国内外其他地区CV-A2分离株的关系。方法采集2013年珠海市手足口病患儿粪便标本,提取病毒RNA,用半巢式RT-PCR方法扩增5′UTR-VP4-VP2区,通过测序和Blast比对确定病毒型别,并利用DNAStar软件和MEGA4.1软件分别对珠海市CV-A2分离株进行核苷酸序列分析和遗传进化树分析。结果共鉴定出4株CV-A2,核苷酸序列分析表明CV-A2珠海株与2012年中国香港株在5′UTR-VP4-VP2区有最高的同源性,达97.4%~98.2%;进化树分析显示4株CV-A2珠海株与2012年中国香港株共同构成A进化树分支,Bootstrap值为99%。结论珠海市4株CV-A2与2012年中国香港株在5′UTR-VP4-VP2区具有较高的同源性,且进化关系密切。
2015年02期 v.5 109-113页 [查看摘要][在线阅读][下载 145K] - 张玉林;刘琳;夏俊珂;曾航;王麟;刘鹏;邹清华;王玲;庄辉;
目的建立兔抗戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)抗体定量线性标准品并对其应用效果进行评价。方法利用抗-HEV抗体检测试剂盒筛选出本实验室的抗-HEV抗体阳性兔血清S26。用世界卫生组织(World Health Organization,WHO)抗-HEV Ig标准品对其进行标定并检测其稳定性。将S26血清稀释至其线性范围,再倍比系列稀释5个稀释度作为定量线性标准,进行多次实验考评其重复性和应用效果。结果经3次标定,S26血清抗-HEV水平为39.54IU/ml,95%CI为39.47~39.62IU/ml,变异系数<0.1%,稳定性好。从3.95IU/ml开始的5个倍比系列稀释度可作为兔抗-HEV抗体定量线性标准品,其重复性好且可有效地反映兔血清抗体水平变化趋势。结论本研究建立的兔抗-HEV抗体定量线性标准品,稳定性、重复性好,可用于兔HEV的疫苗原性评价及流行病学调查。
2015年02期 v.5 114-117页 [查看摘要][在线阅读][下载 136K] - 张乐;黄红玉;顾光煜;毕永春;胡娅莉;周乙华;
目的调查江苏省孕妇人群戊型肝炎病毒(HEV)感染情况,并观察孕妇产后及其子女的血清学标志变化。方法纳入497例2002年8月~2004年7月采集血清的孕中期孕妇,并于2009年10月~2010年3月进行随访,同时对其子女随访。用重组4型HEV ORF2蛋白主要抗原决定簇多肽及其截短多肽为包被抗原的ELISA法,初筛血清抗-HEV IgM和IgG,初筛阳性样本用Western blotting确认;RT-PCR检测血清HEV RNA。结果 497例孕中期孕妇平均年龄(25.0±3.0)岁,产后随访年龄(31.7±3.5)岁。孕中期抗-HEV IgM阳性3例(0.60%),抗-HEV IgG阳性55例(11.07%)。产后随访时分别有2例抗-HEV IgM和18例抗-HEV IgG由阳性转为阴性,另外各有2例抗-HEV IgM和18例抗-HEV IgG由阴性转为阳性,故产后随访时抗-HEV IgM阳性仍为3例(0.60%),抗-HEV IgG阳性仍为55例(11.07%),该人群6年累计抗-HEV IgG阳性73例(14.69%)。随访的497例儿童平均年龄(6.0±0.6)岁,抗-HEV IgM阳性1例(0.20%),抗-HEV IgG阳性2例(0.40%)。3例孕中期抗-HEV IgM和IgG同时阳性孕妇未发生妊娠或新生儿不良事件,随访时其子女抗-HEV IgM和IgG均为阴性;18例随访期间抗-HEV由阴性转为阳性母亲的子女抗-HEV均为阴性。抗-HEV IgM阳性血清均未检测到HEV RNA。结论与我国报道的普通人群抗-HEV IgG阳性率(20%~40%)相比,江苏地区孕妇HEV既往感染率较低。母亲与子女间发生家庭内病毒传播的可能性较小。
2015年02期 v.5 118-124页 [查看摘要][在线阅读][下载 178K] - 唐情容;何清;廖雪姣;敖飞建;唐奇远;艾书玲;赖长祥;吕德良;
目的构建丙氨酸氨基转移酶(ALT)<2倍正常值上限(ULN)慢性乙型肝炎(乙肝)肝纤维化评分模型。方法选择249例ALT<2倍ULN的慢性乙型病毒性肝炎患者,根据临床经验及相关文献筛选出临床常规指标,经Spearman等级相关逐一分析各指标与肝纤维化之间的关联性,筛选其中6项指标(P<0.05,r>0.259),建立评分模型DMFibroS。通过计算各指标的相对比值,得出分值并累加,使用受试者工作特征曲线(ROC)评价其诊断能力并进行验证。结果纳入患者249例,其中建模组204例,验证组45例。分析6项指标(包括年龄、血小板计数、透明质酸、γ-谷氨酰转肽酶、HBV DNA、脾厚)诊断肝纤维化的受试者工作特征曲线下面积(AUC)波动在0.660~0.777。综合6项指标建立DMFibroS模型,拟将各指标诊断肝纤维化相对比值分别设定为1.0分、1.1分、1.5分,经计算AUC为0.835,6项指标总计6.7分为肝纤维化≥S2的最佳诊断点,此时敏感度为71.2%,特异度为82.8%。以45例患者进行验证,准确度为77.8%。结论 DMFibroS能准确判断ALT<2倍ULN慢性乙肝肝纤维化程度,具有较高的敏感度及准确度,可在一定程度上替代此类患者行肝组织活检。
2015年02期 v.5 125-129页 [查看摘要][在线阅读][下载 134K] - 修文琼;郑奎城;刘光华;康育兰;吴冰珊;陈炜;
目的了解KI多瘤病毒(karolinska institutet polyomavirus,KIPyV)在我国福州儿童呼吸道感染中的检出情况及与呼吸道疾病的关系,并对毒株进行全基因组序列测定和种系分析。方法收集2007年11月~2014年3月在福建省福州市妇幼保健院因呼吸道感染住院的重症监护病房(PICU)的235例小儿鼻咽抽取物样本,通过巢式PCR扩增法用2对特异引物对KIPyV的VP1基因片段进行检测。对检测出的1株KIPyV(FZ52)用4对全基因序列引物进行扩增和拼接,获得该株病毒的全基因组序列,上传GenBank并与基因库中国外其他8株KIPyV的全基因组序列和氨基酸序列进行比对,并做种系分析。结果从中发现1例KIPyV感染阳性病例,检测阳性率为0.4%,没有检测出KIPyV与其他呼吸道病毒的混合感染,如甲、乙型流感病毒(influenza type A or B virus,Flu A or B)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)、人偏肺病毒(human metapnumovirus,HMPV)、人博卡病毒(human bocavirus,HBoV)、WU多瘤病毒(WU polyomavirus,WUPyV)等。与参考株斯德哥尔摩的S60相比,有8个核苷酸不同,推导出的氨基酸序列有3处不同。同时,也将该序列与国内毒株的部分核苷酸序列进行比对分析。FZ52株与斯德哥尔摩的S380株关系较近,FZ52株、S380株与聚成一簇的S350株和布里斯班的B003株关系较近。结论种系分析显示中国福建福州的FZ52株与瑞典的S380株关系最近。
2015年02期 v.5 130-135页 [查看摘要][在线阅读][下载 144K] - 张微;郭金金;李天君;张文学;郭崇健;宋艳;车进;张燕华;李美霖;
目的调查分析北京地区无偿献血人员的人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)流行情况,从而推动HCMV筛选在输血事业中的发展。方法随机筛选1 696例北京市无偿献血者血液样本,ELISA方法检测人巨细胞病毒免疫球蛋白G(HCMV-IgG)和人巨细胞病毒免疫球蛋白M(HCMV-IgM),并对献血者的性别、年龄、学历、职业与HCMV感染率间的关系使用SPSS 21.0软件进行了χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果北京地区无偿献血者HCMV-IgM、HCMV-IgG阳性率分别为2.12%和91.86%,不同性别、不同年龄及不同职业的无偿献血者HCMV-IgG阳性率差异有统计学意义,不同年龄的献血者HCMV-IgM阳性率差异有统计学意义。结论北京市无偿献血人群HCMV感染率与我国其他地区的数据略有不同,说明我国不同地区HCMV感染率存在一定差异。性别、年龄、职业等是导致献血者HCMV感染率存在差异的因素。
2015年02期 v.5 136-138页 [查看摘要][在线阅读][下载 101K] - 谷金莲;于洋;梁争论;
目的分析目前市场上应用的国产丙型肝炎病毒抗体酶联免疫试剂(抗-HCV EIA)质量。方法按《中国药典》2010年版三部标准,应用第五套抗-HCV EIA国家参考品血清盘(Panel)中65份参考品,检测2013年国家药品专项抽检来源于23个省市及内蒙古和新疆维吾尔自治区的84个抽样单位的96个批次国产抗-HCV EIA试剂,采用SPSS 16.0统计学软件,用χ2检验对4种试剂69个批次(分别选择4℃与37℃放置)的阴阳性参考品检出率进行分析。结果抽检的抗-HCV EIA试剂质量均达到国家对血液筛查标准要求,合格率为100.0%(96/96);对分别选择4℃与37℃加速稳定性放置的4种(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,占国家专项抽检批次71.9%)试剂进行平行检测,结果显示:30份阴性参考品符合率为96.7%(29/30)的批次分别为22/24:24/24:11/13:7/8与21/24:21/24:8/13:7/8;30份阳性参考品符合率为96.7%(29/30)的批次分别为21/24:5/24:8/13:6/8与19/24:3/24:10/13:4/8,相同放置方法不同试剂灵敏度间差异有统计学意义(P<0.01),而特异性差异均无统计学意义(P>0.05);同种试剂不同放置方法检测结果基本相近。国产试剂的批内变异系数均在3.0%~14.0%,精密度检测均达到试剂质量要求,但除I试剂外其他三种试剂批间差均大于15.0%。结论国产抗-HCV EIA质量及质量控制标准有待进一步提高。
2015年02期 v.5 139-143页 [查看摘要][在线阅读][下载 124K]