- 冯一帆;刘雪;徐柯;冯霞;曾毅;余双庆;
目的构建单价抗体并与IgG比较结合活性及中和活性的差异。方法对IgG1抗体重链恒定区基因进行改造,分别构建N端截短型的IgG1重链恒定区基因IgG1-tH和去除绞链区二硫键及CH2、CH3区的稳定非共价键的2G12重链基因2G12-HM。将IgG1-tH与2G12抗体重链和轻链基因表达质粒共转染293T细胞,表达含有完整Fc的单价抗体;将2G12-HM和轻链基因表达质粒共转染293T细胞,表达半分子型的单价抗体。通过非还原SDS-PAGE对表达抗体的大小进行鉴定,并用ELISA和微量中和实验比较原型2G12抗体和单价抗体的结合活性及中和活性。结果以HIV-1中和抗体2G12为模型通过基因改造成功表达了两种单价抗体,一种为完整的重链、轻链以及N端截短型的重链分子组成的包含1个Fab和1个Fc的单价抗体2G12-tH;另一种为1条重链和1条轻链组成的半分子型单价抗体2G12-HM。两种抗体均可与抗原有效结合,且与IgG分子相比差异无统计学意义。中和实验结果发现IgG抗体能中和的,病毒两种单价抗体也均能中和。结论成功构建了两种单价抗体,与IgG相比其结合活性和中和活性无明显变化。
2015年03期 v.5 171-175页 [查看摘要][在线阅读][下载 373K] - 陈广磊;焦艳梅;吴昊;
目的探究人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者感染1年内HIV-1总DNA、2-LTR环状DNA和整合型DNA的变化情况。方法从HIV急性期队列中选取疾病进展速度不同的两组患者,"高CD4组"CD4计数在1年内大于500个/μl,"低CD4组"CD4计数在1年内小于300个/μl。比较两组患者在同一感染时间点时总HIV DNA、2-LTR环状HIV DNA及整合HIV DNA的水平,及同一组患者在不同感染时间点时的总HIV DNA、2-LTR环状HIV DNA和整合HIV DNA的水平。结果 "高CD4组"和"低CD4组"间总HIV DNA在感染第12个月时差异有统计学意义(U=2.958,P<0.05),2-LTR环状HIV DNA及整合HIV DNA在两组间差异无统计学意义。"高CD4组"总HIV DNA在感染第1个月和第12个月间差异有统计学意义(H=2.502,P<0.05),"低CD4组"各个月份间差异无统计学意义。结论对于急性HIV感染的患者,尤其是感染1年内的患者,总HIV DNA有较好的临床应用价值,可以辅助预测患者的疾病进展情况。
2015年03期 v.5 176-180页 [查看摘要][在线阅读][下载 460K] - 陆小凡;李威;吴昊;焦艳梅;
目的建立HIV-1DNA的实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测方法。方法根据HIV-1NL4-3LTR基因及人CCR5基因序列设计引物,构建质粒标准品,建立绝对定量检测方法,对检测方法的重复性和特异性进行评价。用该方法对20例HIV-1感染者HIV-1DNA进行定量检测。结果构建了HIV-1DNA绝对定量的标准品质粒,标准曲线的相关系数在0.99以上,重复性试验中变异系数小于3%,检测下限为1×103拷贝/μl。20例HIV-1感染者样品中,14例样品检测到HIV-1DNA,检出率为70%。结论 HIV-1DNA real-time PCR检测方法具有快速、特异性强和稳定性好等优点,为进一步研究HIV-1DNA与疾病进程的关系和评价抗病毒疗效等方面奠定了基础。
2015年03期 v.5 181-184页 [查看摘要][在线阅读][下载 226K] - 李珊;刘媛媛;李宁;张一卉;陈铁龙;张君;杨占秋;江晓静;
目的分析武汉地区住院艾滋病患者合并巨细胞病毒(CMV)感染特点,比较不同体液标本CMV DNA阳性率及与CMV感染相关的因素。方法采用实时荧光定量PCR法检测患者体液中CMV DNA载量,采用微粒子酶学免疫化学发光法检测血清CMV IgM和IgG,流式细胞术检测患者血CD4+T细胞数。结果 117例住院艾滋病(AIDS)患者中CMV感染患者72例,阳性率为61.5%。血液、唾液、尿液及脑脊液CMV DNA阳性率依次为53.8%、59.2%、56.3%和20.0%。CMV IgM阳性者有8例,阳性率为6.8%,CMV IgG阳性者有59例,阳性率为50.4%。CMV感染患者中CD4+T细胞数低于50个/μl比例多于CMV阴性患者。结论住院艾滋病患者CMV感染阳性率较高,尤其是在血液、尿液及唾液样本中,CMV DNA是合并感染的监测指标。CMV感染多发生于CD4+T细胞低下的患者,感染可引起多器官损害。
2015年03期 v.5 185-188页 [查看摘要][在线阅读][下载 121K] - 李亚敏;周为民;赵彦杰;林峰;王延群;陆柔剑;楼永良;谭文杰;
目的了解重症社区获得性肺炎(CAP)儿童中常见呼吸道病毒感染情况及人腺病毒(HAdV)感染的分子型别与临床特征。方法收集浙南地区293份住院重症CAP儿童的痰吸液,使用PCR方法,进行16种呼吸道病毒检测,并对其中人腺病毒阳性样本进行分型分析与临床特征分析。结果常见呼吸道病毒检出率为92.8%(272/293),其中以呼吸道合胞病毒(RSV)(37.2%,109/293)、人博卡病毒(HBoV)(22.5%,66/293)、人鼻病毒(HRV)(17.1%,50/293)等检出率较高。人腺病毒共检出24份(8.2%,95%CI4.9%~11.5%)阳性,以2岁以下儿童易感。人腺病毒阳性样本中,C组占83.3%(20/24;HAdV-2:8例,HAdV-5:6例,HAdV-1:5例,HAdV-6:1例),B组占12.5%(3/24;HAdV-3:2例,HAdV-7:1例),E组(HAdV-4)1份。临床症状除咳嗽外其余在HAdV感染者与非感染者中差异均无统计学意义。结论浙南地区重症社区获得性肺炎住院儿童痰吸液样本中常见呼吸道病毒感染检出率较高,人腺病毒也是较常见的病原体,且以C组中的1、2、5型最为常见。
2015年03期 v.5 189-193页 [查看摘要][在线阅读][下载 409K] - 朱小娟;郭喜玲;祁贤;葛以跃;陈银;余慧燕;史智扬;周明浩;崔仑标;
目的了解2013年华东地区活禽市场分离的一株H9N9亚型禽流感病毒(命名为:A/chicken/Changzhou/C08/2013)的分子特征,探讨该病毒的出现对新型H7N9亚型禽流感病毒防控的意义。方法采用高通量测序技术对该分离株进行全基因组测序,MEGA6.0软件进行序列比对,采用邻近归并法(neighbor-joining)构建系统发生树进行基因特征分析。结果 A/chicken/Changzhou/C08/2013血凝素基因(HA)与上海鸡分离株A/chicken/Shanghai/1107/2013(H9N2)的核苷酸一致性最高(99.2%),其HA基因裂解基序为VPSRSSR↓GLF,呈典型低致病性禽流感病毒(AIV)分子特征;其余的基因则与新型H7N9亚型禽流感病毒的同源性较高(>99.6%)。结论推测该H9N9病毒是由H9N2亚型AIV与新型H7N9亚型AIV发生重配的新型病毒,其HA基因来源于为H9N2亚型AIV,其他基因来源于新型H7N9亚型AIV,结果提示新型H7N9亚型AIV正在与禽中流行的其他亚型AIV进行重组,需要加强对AIV的持续监测。
2015年03期 v.5 194-200页 [查看摘要][在线阅读][下载 2065K] - 孙立莹;杜海军;李红霞;叶树清;周玲;曾毅;王湛;
目的贴壁法分离小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),观察表达EBV LMP2蛋白的小鼠MSCs(MSCs-LMP2)体内诱导特异性CTL应答效果。方法贴壁培养法分离BALB/c小鼠MSCs,流式细胞术鉴定MSCs纯度。利用携带EBV LMP2基因的非复制重组5型腺病毒(Ad5-LMP2)感染已鉴定小鼠MSCs,制备表达EBV LMP2蛋白的MSCs-LMP2。使用MSCs-LMP2肌内注射的方式免疫BALB/c小鼠,每次免疫剂量6×105个细胞,免疫间隔为1周,连续免疫5次。末次免疫后1周分离小鼠脾淋巴细胞,Elispot方法检测EBV LMP2特异性CTL应答。结果贴壁培养法分离、纯化的小鼠骨髓MSCs纯度可达91.8%;Ad5-LMP2感染的MSCs能很好表达LMP2蛋白,形成MSCs-LMP2,MSCs-LMP2免疫同种小鼠后,在1×106个小鼠脾淋巴细胞中,诱导产生的LMP2特异性CTL能达到323个。结论贴壁培养法能够获得纯度较高的小鼠骨髓MSCs;LMP2修饰的MSCs(MSCs-LMP2)能诱导同种小鼠产生特异性CTL应答。
2015年03期 v.5 201-207页 [查看摘要][在线阅读][下载 1203K] - 朱冰;游绍莉;刘鸿凌;荣义辉;李晨;臧红;万志红;辛绍杰;
目的总结分析大宗散发性急性戊型病毒性肝炎(hepatitis E)的临床特点,为散发性戊型肝炎的防治提供依据。方法收集解放军第三〇二医院2003-2012年所有急性戊型病毒性肝炎的临床资料,对患者临床分型、转归等采用SPSS 21.0统计软件进行统计分析,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,组间均数比较符合正态分布、方差齐性者用t检验和方差分析;不符合正态分布、方差齐性者用秩和检验。P<0.05为差异有统计学意义。结果 2003-2012年解放军第三〇二医院共收治急性戊型肝炎患者1 489例,主要来自华北地区,以冬春季节多发,常见于青中年患者,占急性戊型肝炎患者总数的73.81%。急性黄疸型(总胆红素值≥17.1μmol/L)1 376例,占92.41%,急性无黄疸型113例,占7.59%。普通型戊型肝炎患者最多,占78.64%(1 171/1 489);淤胆型戊型肝炎患者186例,占12.49%;戊型肝衰竭患者132例,占8.87%。治疗好转率在普通肝炎组、淤胆型肝炎组、肝衰竭组分别为97.78%(1 145/1 171)、97.31%(181/186)、39.39%(52/132),肝衰竭组明显比其他两组转归差(P<0.05),同时重叠感染在肝衰竭组占50.00%,与其他两组之间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。老年戊型肝炎患者(年龄≥60岁)376例(25.25%),青少年戊型肝炎(年龄<18岁)14例(0.94%)。老年治愈好转率92.29%;青少年治愈好转率100.00%。结论散发性戊型肝炎一般预后较好,但是发展为肝衰竭者预后较差,年龄大、重叠感染、肝硬化基础是病情危重的危险因素。
2015年03期 v.5 208-211页 [查看摘要][在线阅读][下载 156K] - 潘丽峰;刘青;刘丹;邱慧芳;陆岚;丁明;邹文玮;马平;朱林英;郝莉鹏;
目的了解上海浦东新区诺如病毒相关病毒性腹泻的流行病学特点。方法收集2011年7月至2014年7月间14家哨点医院肠道门诊腹泻病例的粪便样本,应用real-time RT-PCR法分别检测诺如病毒的GI和GII两个亚型,并对其流行特征进行分析。结果在6 392份样本中,GⅠ型共检出70例,检出率1.10%,呈低位流行、全年散发状态,无明显的季节分布;GⅡ型共检出962例,检出率15.05%,显著高于GⅠ型,存在明显的季节分布,每年的10月是感染的最高月份,3~4月是另一个感染的小高峰。GⅠ和GⅡ型双重感染共21例,检出率0.33%,多见于中年人群。人口密集的沿江片区,诺如病毒的检出率显著高于人口稀疏的沿海片区。结论秋季要密切监测人口密集地区诺如病毒的感染情况,防止诺如病毒感染而造成的聚集性事件。
2015年03期 v.5 212-216页 [查看摘要][在线阅读][下载 497K] - 石磊泰;邹剑;俞永新;王玲;曹守春;董关木;李玉华;
目的了解狂犬病病毒减毒株CTN-181在豚鼠颌下腺的繁殖动态并获得毒力更低的病毒纯化克隆株。方法将CTN-181经刚离乳豚鼠颈部皮下注射,分别于1、2、3和4d取颌下腺分离狂犬病病毒,测定各天次颌下腺内的病毒滴度。用滴度高的病毒液进行下一次豚鼠颌下腺传代,连续传3代。将第3代颌下腺传代的病毒液在BHK21细胞上进行空斑试验,挑选单个病毒克隆,以3周龄小鼠脑内接种测病毒毒力。筛选对小鼠不致病的克隆株进一步测定其对乳鼠的脑内毒力,并以乳鼠脑内传代和豚鼠颌下腺传代检测其遗传稳定性。结果 CTN-181在豚鼠颌下腺能短暂轻度繁殖,通过颌下腺传代后病毒毒力明显有回升。获得19个病毒克隆,不同克隆病毒的毒力不同,为0~3.16lg LD50;3株脑内无致病力的克隆株对乳鼠的毒力亦有减弱;乳鼠脑内和颌下腺回传后毒力无回升返祖,即传代后的病毒对小鼠均无致病力。结论CTN-181母株对3周龄小鼠仍存在低水平毒力,经豚鼠颌下腺传代后毒力十分不稳定。筛选到的3株克隆病毒较其母株的毒力更低,遗传稳定性更高,更适合作为狂犬病兽用口服疫苗候选株。
2015年03期 v.5 217-222页 [查看摘要][在线阅读][下载 574K]