- 王静;乔露华;李曼郁;罗光湘;
目的应用CRISPR/Cas9系统建立B4GalT7基因敲除的Huh-7.5细胞株,进而验证其对丙型肝炎病毒(HCV)感染的影响。方法针对人源B4GalT7基因设计3个不同的sgRNA,构建同时表达Cas9和sgRNA的慢病毒转移质粒,制备重组慢病毒并转导Huh-7.5细胞,用嘌呤霉素筛选细胞克隆,提取细胞克隆的基因组DNA,对sgRNA靶点附近的DNA片段进行PCR扩增,纯化PCR产物测序分析鉴定,并用Western blot进一步验证B4GalT7蛋白表达情况。成功建立基因敲除细胞株后,比较其与野生型Huh-7.5细胞株对HCV的易感性。结果成功建立了B4GalT7基因敲除的Huh-7.5细胞株,证明HCV对该细胞株的感染能力明显低于野生型Huh-7.5细胞株。结论 B4GalT7基因敲除可显著减弱HCV对细胞的感染。
2015年04期 v.5 246-252页 [查看摘要][在线阅读][下载 3217K] - 李蕊;李垚;孟庆华;张占卿;赵平;商庆华;王介非;陈晓蓉;李越;李彤;刘学恩;庄辉;
目的观察国产拉米夫定-贺甘定优化治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎(乙肝)患者48周的疗效和病毒耐药发生情况。方法入组93例HBeAg阳性慢性乙肝患者,符合我国《慢性乙肝防治指南(2010年版)》治疗指征,口服国产拉米夫定-贺甘定100mg/d,如治疗至24周时血清HBV DNA>300拷贝/ml或发生病毒学突破的患者,则加用国产阿德福韦酯-阿甘定10mg/d;如治疗至24周时血清HBV DNA≤300拷贝/ml,则继续用贺甘定100mg/d单药治疗。在治疗48周中,每12周应用罗氏荧光定量PCR试剂检测血清HBV DNA及雅培化学发光试剂检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg和抗-HBe。用PCR产物直接测序法进行血清HBV DNA耐药检测。结果 93例HBeAg阳性慢性乙肝患者治疗至48周时有6例失访,失访率为6.5%。贺甘定优化治疗慢性乙肝患者48周时,病毒学应答率(HBV DNA≤300拷贝/ml)为49.4%(43/87),HBsAg阴转率为1.1%(1/87),HBeAg阴转率为23.0%(20/87),HBeAg血清学转换率为19.5%(17/87),丙氨酸氨基转移酶(ALT)复常率为80.2%(69/86),天冬氨酸氨基转移酶(AST)复常率为95.3%(82/86),耐药发生率为4.6%(4/87)。结论贺甘定优化抗病毒治疗HBeAg阳性慢性乙肝患者48周可有效抑制HBV复制,改善肝功能,促进HBeAg血清学转换,且耐药突变率较低。
2015年04期 v.5 253-257页 [查看摘要][在线阅读][下载 139K] - 侯枫林;汪为刚;翟银生;高阳;江凯;张慧;马世武;
目的了解流动人口密集的中山南朗医院住院孕妇人群乙型肝炎(乙肝)血清流行病学特点,评估乙肝预防措施的效果。方法回顾性分析中山市南朗医院2009-2014年住院的孕妇临床数据,用ELISA方法检测孕妇及相关新生儿的乙肝血清标记物,分层分析不同地区和年龄的孕妇乙肝表面抗原(HBsAg)携带率。结果 2009-2014年中山市南朗医院住院孕妇主要为省外户籍孕妇66.3%(4 666/7 034),HBsAg携带率8.63%(607/7 034)。分层分析中山市户籍(9.09%)、省内市外户籍(10.79%)和省外户籍(7.97%)住院孕妇的HBsAg携带率差异有统计学意义(P=0.008);省外户籍2014年孕妇HBsAg携带率较2009年明显升高(10.83%vs 5.53%,P=0.005)。HBsAg阳性孕妇的新生儿HBsAg携带率从2009-2011年的11.58%下降至2012-2014年的6.42%(P=0.033)。结论中山市南朗医院住院孕妇HBsAg总体携带率高,省内和省外孕妇之间HBsAg携带率均呈现地区不均衡,流动孕妇人群的HBV感染应该得到进一步监控。
2015年04期 v.5 258-262页 [查看摘要][在线阅读][下载 348K] - 陈利娜;肖康;杨晓东;杨慧;董小平;石琦;
目的研究小鼠朊病毒病脑组织中一氧化氮/一氧化氮合酶(NO/NOS)系统与水孔通道蛋白亚硝基化修饰(SNO-AQP1)的相关性。方法以朊病毒毒株139A、ME7感染的小鼠为实验模型,制备不同感染期的脑组织匀浆液,应用NO、NOS测试盒测定朊病毒病小鼠潜伏期内不同时间点脑组织内NO含量和NOS活力,并利用免疫印迹法对NOS、水孔通道蛋白(aquaporin,AQP1)及亚硝基化AQP1(SNOAQP1)等蛋白的含量进行检测。结果朊病毒毒株139A感染的小鼠脑组织中,感染中期(86d,117d、147d)NO含量增加,NOS的活力同时增强;而终末期(177d)NO含量下降,同时NOS活力相对减弱。朊病毒毒株ME7感染的小鼠脑组织中,86d时NO含量急剧增加,NOS活力增强,而在177d终末期时,NO含量降低、NOS活力也减弱。免疫印迹法显示,NOS含量因毒株的不同有一定差异,在139A和ME7感染小鼠的小脑组织中,分别以86d和117d为最高,之后逐渐降低,其变化趋势与NOS活力变化趋势不一致。139A毒株AQP1蛋白在86d显著升高,之后下降,从117d至终末期差异无统计学意义,而ME7株所有时间点无变化。但在两种毒株感染的小鼠小脑组织中,SNO-AQP1含量的变化规律均是在感染中期(86d、117d、147d)升高,终末期降低。结论小鼠朊病毒病脑组织中SNO-AQP1水平受NO/NOS系统中NOS活性影响而与NOS含量无关。
2015年04期 v.5 263-268页 [查看摘要][在线阅读][下载 488K] - 董哲;熊润松;梁富雄;胡婧;潘冬;廖玲洁;冯毅;邵一鸣;
目的分别以HIV-1RNA和前病毒DNA为模板进行扩增实验,比较不同实验方法对判断HIV-1阳转家庭基因关联性的效率。方法对国家分析库中确认的阳转家庭,分别提取HIV-1RNA和前病毒DNA,用巢式PCR扩增pol区基因,通过系统进化树和基因距离分析配对家庭基因关联性。结果以RNA为模板扩增211份HIV-1阳性血浆,获得42份(42/211,19.91%)基因序列。其中共有12对配对家庭,确定有传播关系10对(10/12,83.33%),确定无传播关系1对(1/12,8.33%),不确定是否有传播关系1对(1/12,8.33%);以前病毒DNA为模板扩增270份HIV-1阳性全血,获得232份(232/270,85.93%)基因序列。其中共有97对配对家庭,确定有传播关系86对(86/97,88.66%),确定无传播关系7对(7/97,7.22%),不确定是否有传播关系4对(4/97,4.12%)。以RNA和前病毒DNA为模板扩增的序列系统进化树Bootstrap值高度相关(r=0.86,P=0.001),基因距离差异无统计学意义(Z=-8.10,P=0.443)。结论以前病毒DNA为模板能显著提高扩增阳性率,特别是在抗病毒治疗家庭中。前病毒DNA在一定程度上可以代替RNA为模板进行扩增,判断家庭内传播的关系。
2015年04期 v.5 269-276页 [查看摘要][在线阅读][下载 624K] - 周海卫;石大伟;沈舒;曹丽梅;张春涛;
目的建立EB病毒衣壳抗原IgA抗体检测试剂国家参考品,为相关试剂盒的质量控制和评价提供依据。方法通过收集鼻咽癌患者及正常人血浆,对其进行酶联免疫法抗体筛查,膜条法和免疫荧光法抗体确证,获得VCA-IgA抗体阳性样本;使用市场常用的7种EB病毒衣壳抗原IgA抗体检测试剂盒对候选样本进行协作标定,确定EB病毒衣壳抗原IgA抗体检测试剂参考品的组成及质量标准;并对其进行稳定性考核。结果协作标定结果为阴性参考品符合率9/10~10/10,阳性参考品符合率7/10~10/10,精密性1.0%~10.7%,最低检出限最低为1∶4,最高为1∶16;4℃放置1周及2周、室温(25℃)放置3d及反复冻融5次均不影响参考品的稳定性。结论成功建立了EB病毒衣壳抗原IgA抗体检测试剂参考品,可用于该类试剂的质量控制。
2015年04期 v.5 277-280页 [查看摘要][在线阅读][下载 122K] - 马文瑛;张慧;姜中毅;李红育;苗砚迪;段莉平;于德山;
目的了解兰州市住院病例中严重急性呼吸道感染(severe acute respiratory infection,SARI)住院病例的病毒病原学构成、季节分布和临床特征,为兰州市SARI病例的临床诊断治疗及防控提供线索和依据。方法对2009年12月至2013年12月在兰州大学第一医院内科急诊病房、呼吸科、儿科及ICU病房住院治疗的804例SARI病例采集鼻咽拭子进行病毒核酸检测,同时收集病例的临床特征等相关信息。结果4年共检测804份病例咽拭子,病毒阳性病例328例,检出率为40.80%,其中流感病毒(Flu)阳性率14.18%、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)阳性率12.06%、腺病毒阳性率2.98%、副流感病毒Ⅰ~Ⅲ型阳性率7.12%,鼻病毒(HRV)阳性率7.84%,4种非SARS冠状病毒(COV)阳性率4.10%,偏肺病毒(HMPV)阳性率1.99%,博卡病毒(BoCA)阳性率0.87%,肠道病毒(EV)阳性率0.62%。结论兰州市SARI住院患者病毒检出率最高的是流感病毒和RSV,病毒感染可能是加重SARI病例临床症状的原因之一;不同病毒感染所致疾病特征有所差异,流感病毒以上呼吸道感染为主,RSV以支气管肺炎为主。
2015年04期 v.5 281-286页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K] - 张杰;丁峥嵘;田炳均;赵智娴;汤晶晶;
目的对2007-2010年云南省急性迟缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例和健康儿童中非脊灰肠道病毒(non-polio enterovirus,NPEV)的分离情况进行比较,分析引起AFP的主要病原并对分离到的病毒基因特征进行分析。方法对云南省2007-2010年AFP病例粪便样本和<15岁健康儿童粪便样本进行病毒分离和基因测序定型,对两类人群中的病毒分离状况进行比较。结果 2007-2010年共从931例AFP病例粪便样本中检测到NPEV 63株,分离率为6.8%(63/931),其中肠道病毒A组(enterovirus A,EV-A)12株,占19.1%(12/63),肠道病毒B组(EV-B)46株,占73.0%(46/63),肠道病毒C组(EV-C)5株,占7.9%(5/63);从1 256份健康人群粪便样本中分离到NPEV 115株,分离率为9.2%(115/1256),其中EV-A 5株,占4.4%(5/115),EV-B 101株,占87.8%(101/115),EV-C 9株,占7.8%(9/115);在两组人群中均未分离到肠道病毒D组(EV-D)病毒。对两组人群中常见病毒的基因进化分析表明,这些病毒具有基因多样性特点。结论云南省2007-2010年连续4年的监测表明,AFP病例中EV-A组病毒和EV-C的分离率(19.1%和7.9%)均高于健康人群(4.3%和7.8%),而健康人群中EV-B组病毒阳性率(87.8%)高于AFP病人(73.0%),EV-A组病毒和EV-C组病毒可能是引起AFP的主要病原。基因进化分析表明,云南省EV-B组病毒中的某些病毒可分为2~5个不同的进化分支(Cluster),具有基因多样性特点。
2015年04期 v.5 287-292页 [查看摘要][在线阅读][下载 590K] - 杨婷;李华;谢天宏;杨水芝;洪超;岳磊;朱凡丽;张也;宋霞;龙润乡;杨蓉;罗芳宇;谢忠平;
目的评价不同方法纯化柯萨奇病毒A组16型(Coxsakievirus A 16,CA16)的可行性和有效性。方法将CA16病毒收获液经切向流超滤浓缩后,分别进行离心、氯仿抽提、分子筛和蔗糖垫层/梯度离心,按《中国药典》(三部)(2010版)的检定要求检测不同纯化方法得到的样品,检测指标包括:感染性滴度、抗原含量、蛋白含量、比活性、HPLC纯度、残余牛血清白蛋白、残余抗生素、免疫原性。结果从比活性来看,分子筛纯化法是其他方法的2~21倍,明显优于其他工艺;经HPLC检测,分子筛纯化样品纯度>98%,而其他工艺均在50%以下;分子筛法所得纯化样品中牛血清白蛋白残留量符合《中国药典》要求(<50ng/剂),去除率达99.97%;分子筛法和蔗糖垫层/梯度离心法所得纯化样品中抗生素残留量符合《中国药典》要求(<50ng/剂),分子筛法去除率在80%以上;从免疫小鼠后的抗体阳转率来看,离心和氯仿抽提样品组阳转率为100%,分子筛组为80%,蔗糖离心组为50%;从抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)来看,氯仿抽提组最高,为1∶912。结论以Sepharose 6Fast Flow作为层析介质的分子筛法可得到高纯度的CA16病毒,综合分析,该法是CA16较为理想的纯化方法
2015年04期 v.5 293-299页 [查看摘要][在线阅读][下载 852K] - 郏继航;何建华;杨学磊;彭怡;马萍;张艳君;依布拉音;
目的监测2014年乌鲁木齐地区腹泻婴幼儿轮状病毒(RV)感染的基因型特征,为本地婴幼儿RV感染防治提供资料。方法收集2014年1~12月新疆维吾尔自治区人民医院和新疆医科大学第一附属医院5岁以下住院和门诊腹泻患儿大便样本158份,采用ELISA法检测RV抗原,阳性样本使用逆转录-多重聚合酶链反应进行G、P基因分型,并对主要流行株进行序列分析。结果 158份大便样本中,RV阳性检出率为38.6%(61/158)。对61份阳性样本进行基因分型,结果显示:G型以G3为主(47.6%,29/61),其次是G9(13.1%,8/61)和G2(13.1%,8/61),混合感染占26.2%(16/61)。P型以P[6]为主(41.0%,25/61),其次是P[8](19.7%,12/61)和P[4](14.7%,9/61),混合感染占24.6%(15/61)。G/P基因型组合以G3P[6]型为主,其次为G2P[4]型,还检测到其他基因型组合,如G9P[8]、G3P[8]、G9P[6]和G3P[4]型等。经比对主要流行的G3型毒株与武汉株E2432/2010/G3P[8]核苷酸序列同源性为99.7%~99.8%,P[6]型毒株与北京株BJ-CR4916及新疆新生儿株XJ04-652核苷酸序列同源性为98.5%~98.7%。结论 2014年乌鲁木齐地区腹泻婴幼儿RV感染主要流行G3P[6]型,与往年相比混合感染比例增高,非疫苗保护重配株P[6]的流行需给予重视。
2015年04期 v.5 300-305页 [查看摘要][在线阅读][下载 156K] - 陈晨;李智华;丁晨;李亚东;张辉;宫悦;刘彤云;寸韡;
目的对一株Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)进行分离鉴定和增值特性研究。方法从病人口唇疱液样本中分离得到一株病毒,经噬斑纯化、形态鉴定、序列分析,确定该分离株为HSV-1,被命名为HSVIZW6A。用其分别感染Vero细胞、KMB17细胞、A375细胞,观察其细胞病变情况,并绘制生长曲线,分析病毒的生物学特性。结果 HSVI-ZW6A株病毒以MOI=10感染不同细胞,细胞外和细胞内病毒在0~4h,病毒复制缓慢,4~12h病毒增殖进入对数生长期,12~24h病毒增殖缓慢,进入平台期,但24h之后病毒效价测定显示病毒滴度开始呈现下降的趋势,且细胞外病毒最大量高于细胞内,且HSVI-ZW6A株病毒毒力上高于HSVI-strain17病毒。结论通过本实验成功分离和鉴定了一株Ⅰ型HSV病毒,并对其生物学特性进行了分析,为今后的实验奠定了基础。
2015年04期 v.5 306-312页 [查看摘要][在线阅读][下载 2138K]